ڈیلا پروٹین محفوظ ماسٹر ہیں۔ترقی کے ریگولیٹرزجو اندرونی اور ماحولیاتی اشارے کے جواب میں پودوں کی نشوونما کو کنٹرول کرنے میں مرکزی کردار ادا کرتے ہیں۔ DELLA ایک ٹرانسکرپشن ریگولیٹر کے طور پر کام کرتا ہے اور اسے اپنے GRAS ڈومین کے ذریعے ٹرانسکرپشن فیکٹرز (TFs) اور ہسٹون H2A کا پابند کر کے پروموٹرز کو ہدف بنانے کے لیے بھرتی کیا جاتا ہے۔ حالیہ مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ DELLA استحکام کو بعد از ترجمہ کے طور پر دو میکانزم کے ذریعے منظم کیا جاتا ہے: فائٹو ہارمون گیبریلن کے ذریعے حوصلہ افزائی پولی یوبیکیٹینیشن، جو اس کے تیزی سے انحطاط کا باعث بنتی ہے، اور اس کے جمع ہونے میں اضافہ کرنے کے لیے چھوٹے ubiquitin نما موڈیفائرز (SUMO) کا جوڑنا۔ اس کے علاوہ، DELLA کی سرگرمی کو متحرک طور پر دو مختلف glycosylations کے ذریعے منظم کیا جاتا ہے: DELLA-TF تعامل کو O-fucosylation کے ذریعے بڑھایا جاتا ہے لیکن O-linked N-acetylglucosamine (O-GlcNAc) ترمیم کے ذریعے روکا جاتا ہے۔ تاہم، ڈیلا فاسفوریلیشن کا کردار ابھی تک واضح نہیں ہے، جیسا کہ پچھلے مطالعات میں متضاد نتائج دکھائے گئے ہیں، جن سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ فاسفوریلیشن ڈی ایل اے کے انحطاط کو فروغ دیتا ہے یا دوسروں کو کم کرتا ہے یہ ظاہر کرتا ہے کہ فاسفوریلیشن اس کے استحکام کو متاثر نہیں کرتی ہے۔ یہاں، ہم ریپریسر میں فاسفوریلیشن سائٹس کی شناخت کرتے ہیں۔ga1-3(RGA، AtDELLA) بڑے پیمانے پر سپیکٹرومیٹری تجزیہ کے ذریعہ عربیڈوپسس تھالیانا سے پاک کیا گیا ہے اور یہ ظاہر کرتا ہے کہ پولس اور پولی ایس/ٹی علاقوں میں دو آر جی اے پیپٹائڈس کا فاسفوریلیشن H2A بائنڈنگ اور بہتر RGA سرگرمی کو فروغ دیتا ہے۔ ٹارگٹ پروموٹرز کے ساتھ آر جی اے کی ایسوسی ایشن۔ خاص طور پر، فاسفوریلیشن RGA-TF تعاملات یا RGA استحکام کو متاثر نہیں کرتا ہے۔ ہمارا مطالعہ سالماتی طریقہ کار کو ظاہر کرتا ہے جس کے ذریعے فاسفوریلیشن ڈی ایل اے کی سرگرمی کو اکساتا ہے۔
DELLA فنکشن کو ریگولیٹ کرنے میں فاسفوریلیشن کے کردار کو واضح کرنے کے لیے، Vivo میں DELLA فاسفوریلیشن سائٹس کی نشاندہی کرنا اور پودوں میں فنکشنل تجزیہ کرنا بہت ضروری ہے۔ MS/MS تجزیہ کے بعد پودوں کے نچوڑوں کی وابستگی صاف کرکے، ہم نے RGA میں متعدد فاسفوسائٹس کی نشاندہی کی۔ GA کی کمی کے حالات میں، RHA فاسفوریلیشن بڑھتا ہے، لیکن فاسفوریلیشن اس کے استحکام کو متاثر نہیں کرتا ہے۔ اہم بات یہ ہے کہ Co-IP اور ChIP-qPCR اسسیس نے انکشاف کیا ہے کہ RGA کے PolyS/T ریجن میں فاسفوریلیشن H2A کے ساتھ اس کے تعامل اور ہدف پروموٹرز کے ساتھ اس کی وابستگی کو فروغ دیتا ہے، اس طریقہ کار کو ظاہر کرتا ہے جس کے ذریعے فاسفوریلیشن RGA فنکشن کو اکساتی ہے۔
RGA کو TF کے ساتھ LHR1 ذیلی ڈومین کے تعامل کے ذریعے کرومیٹن کو نشانہ بنانے کے لیے بھرتی کیا جاتا ہے اور پھر RGA کو مستحکم کرنے کے لیے H2A-RGA-TF کمپلیکس تشکیل دیتے ہوئے اس کے PolyS/T ریجن اور PFYRE ذیلی ڈومین کے ذریعے H2A سے منسلک ہوتا ہے۔ ڈی ایل اے ڈومین اور جی آر اے ایس ڈومین کے درمیان پولی ایس/ٹی ریجن میں پیپ 2 کا فاسفوریلیشن نامعلوم کناز کے ذریعہ RGA-H2A بائنڈنگ کو بڑھاتا ہے۔ rgam2A اتپریورتی پروٹین RGA فاسفوریلیشن کو ختم کرتا ہے اور H2A بائنڈنگ میں مداخلت کرنے کے لیے ایک مختلف پروٹین کی شکل اختیار کرتا ہے۔ اس کے نتیجے میں عارضی TF-rgam2A تعاملات کی عدم استحکام اور ہدف کرومیٹن سے rgam2A کی علیحدگی ہوتی ہے۔ یہ اعداد و شمار صرف RGA ثالثی ٹرانسکرپشن جبر کو ظاہر کرتا ہے۔ اسی طرح کا نمونہ RGA-ثالثی ٹرانسکرپشن ایکٹیویشن کے لیے بیان کیا جا سکتا ہے، سوائے اس کے کہ H2A-RGA-TF کمپلیکس ہدف جین کی نقل کو فروغ دے گا اور rgam2A کی ڈیفاسفوریلیشن نقل کو کم کرے گی۔ Huang et al.21 سے تبدیل شدہ شکل۔
تمام مقداری اعداد و شمار کا شماریاتی طور پر ایکسل کا استعمال کرتے ہوئے تجزیہ کیا گیا، اور طالب علم کے ٹی ٹیسٹ کا استعمال کرتے ہوئے اہم فرق کا تعین کیا گیا۔ ابتدائی طور پر نمونے کے سائز کا تعین کرنے کے لیے کوئی شماریاتی طریقہ استعمال نہیں کیا گیا۔ تجزیہ سے کوئی ڈیٹا خارج نہیں کیا گیا تھا۔ تجربہ بے ترتیب نہیں تھا؛ محققین تجربے کے دوران ڈیٹا کی تقسیم اور نتائج کی جانچ کے لیے اندھے نہیں تھے۔ نمونہ کا سائز فگر لیجنڈ اور سورس ڈیٹا فائل میں ظاہر کیا گیا ہے۔
مطالعہ کے ڈیزائن کے بارے میں مزید معلومات کے لیے، اس مضمون سے وابستہ نیچرل پورٹ فولیو رپورٹ کا خلاصہ دیکھیں۔
ماس اسپیکٹومیٹری پروٹومکس ڈیٹا کو ڈیٹاسیٹ شناخت کنندہ PXD046004 کے ساتھ PRIDE66 پارٹنر ریپوزٹری کے ذریعے ProteomeXchange کنسورشیم میں فراہم کیا گیا ہے۔ اس مطالعے کے دوران حاصل کردہ دیگر تمام ڈیٹا کو ضمنی معلومات، ضمنی ڈیٹا فائلز، اور خام ڈیٹا فائلوں میں پیش کیا گیا ہے۔ اس مضمون کے لیے ماخذ کا ڈیٹا فراہم کیا گیا ہے۔
پوسٹ ٹائم: نومبر-08-2024