ڈیلا پروٹین محفوظ ہیں۔ترقی کے ریگولیٹرزجو اندرونی اور بیرونی سگنلز کے جواب میں پودوں کی نشوونما میں مرکزی کردار ادا کرتے ہیں۔ ٹرانسکرپشن ریگولیٹرز کے طور پر، DELLAs اپنے GRAS ڈومینز کے ذریعے ٹرانسکرپشن فیکٹرز (TFs) اور ہسٹون H2A سے منسلک ہوتے ہیں اور پروموٹرز پر کارروائی کرنے کے لیے بھرتی کیے جاتے ہیں۔ حالیہ مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ DELLA استحکام کو ترجمہ کے بعد دو میکانزم کے ذریعہ منظم کیا جاتا ہے: پودوں کے ہارمون کے ذریعہ پولی یوبیکیٹینیشنgibberellin، جو ان کے تیزی سے انحطاط کا باعث بنتا ہے، اور چھوٹے ubiquitin-like modifier (SUMO) سے جوڑتا ہے، جس سے ان کے جمع ہونے میں اضافہ ہوتا ہے۔ مزید برآں، DELLA سرگرمی کو دو الگ الگ گلائکوسیلیشن میکانزم کے ذریعے متحرک طور پر منظم کیا جاتا ہے: O-fucosylation DELLA-TF تعامل کو بڑھاتا ہے، جبکہ O-linked N-acetylglucosamine (O-GlcNAc) ترمیم DELLA-TF تعامل کو روکتی ہے۔ تاہم، ڈیلا فاسفوریلیشن کا کردار واضح نہیں ہے کیونکہ پچھلے مطالعات نے متضاد نتائج دکھائے ہیں، کچھ کے ساتھ یہ تجویز کیا گیا ہے کہ فاسفوریلیشن ڈی ایل اے کے انحطاط کو فروغ دیتا ہے یا دباتا ہے اور دوسرے یہ تجویز کرتے ہیں کہ فاسفوریلیشن ان کے استحکام کو متاثر نہیں کرتی ہے۔ یہاں، ہم GA1-3 ریپریسر (RGA)، AtDELLA میں فاسفوریلیشن سائٹس کی نشاندہی کرتے ہیں، جسے Arabidopsis thaliana سے ماس اسپیکٹومیٹری کے ذریعے پاک کیا گیا ہے اور یہ ظاہر کرتے ہیں کہ PolyS اور PolyS/T خطوں میں دو RGA پیپٹائڈس کا فاسفوریلیشن H2A ٹارگٹ بائنڈنگ اور RGA بائنڈنگ کو فروغ دے کر RGA سرگرمی کو بڑھاتا ہے۔ خاص طور پر، فاسفوریلیشن نے RGA-TF تعاملات یا RGA استحکام کو متاثر نہیں کیا۔ ہمارا مطالعہ ایک مالیکیولر میکانزم کو ظاہر کرتا ہے جس کے ذریعے فاسفوریلیشن ڈی ایل اے کی سرگرمی کو اکساتا ہے۔
ہمارے بڑے پیمانے پر سپیکٹرو میٹرک تجزیہ نے انکشاف کیا کہ پیپ 1 اور پیپ 2 دونوں GA کی کمی والے Ga1 پس منظر میں RGA میں انتہائی فاسفوریلیٹ تھے۔ اس مطالعہ کے علاوہ، فاسفوپروٹیومک اسٹڈیز نے RGA میں Pep1 فاسفوریلیشن کا بھی انکشاف کیا ہے، حالانکہ اس کے کردار کا ابھی تک 53,54,55 مطالعہ نہیں کیا گیا ہے۔ اس کے برعکس، پیپ 2 فاسفوریلیشن کو پہلے بیان نہیں کیا گیا ہے کیونکہ اس پیپٹائڈ کا پتہ صرف آر جی اے جی کے جی ٹرانسجن کا استعمال کرتے ہوئے لگایا جا سکتا ہے۔ اگرچہ m1A اتپریورتن، جس نے Pep1 فاسفوریلیشن کو ختم کر دیا، صرف پلانٹا میں RGA کی سرگرمی کو قدرے کم کیا، لیکن RGA سرگرمی کو کم کرنے میں m2A کے ساتھ مل کر اس کا ایک اضافی اثر پڑا (ضمنی شکل 6)۔ اہم بات یہ ہے کہ، پی پی 1 فاسفوریلیشن کو ga1 کے مقابلے میں GA سے بہتر sly1 اتپریورتی میں نمایاں طور پر کم کیا گیا تھا، یہ تجویز کرتا ہے کہ GA RGA dephosphorylation کو فروغ دیتا ہے، اس کی سرگرمی کو کم کرتا ہے۔ وہ طریقہ کار جس کے ذریعے GA RGA فاسفوریلیشن کو دباتا ہے مزید تحقیقات کی ضرورت ہے۔ ایک امکان یہ ہے کہ یہ ایک نامعلوم پروٹین کناز کے ضابطے کے ذریعے حاصل کیا گیا ہے۔ اگرچہ مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ CK1 پروٹین کناز EL1 کا اظہار چاول 41 میں GA کے ذریعہ کم کیا گیا ہے، ہمارے نتائج بتاتے ہیں کہ Arabidopsis EL1 homologue (AEL1-4) کے اعلیٰ ترتیب والے تغیرات RGA فاسفوریلیشن کو کم نہیں کرتے ہیں۔ ہمارے نتائج سے اتفاق کرتے ہوئے، Arabidopsis AEL اوور ایکسپرسنگ لائنوں اور ael ٹرپل اتپریورتی کا استعمال کرتے ہوئے ایک حالیہ فاسفوپروٹیومک مطالعہ نے کسی بھی DELLA پروٹین کی شناخت ان کنیز کے ذیلی ذخیرے کے طور پر نہیں کی۔ جب ہم نے مخطوطہ تیار کیا تو یہ اطلاع ملی کہ GSK3، گندم میں GSK3/SHAGGY نما کناز کو انکوڈ کرنے والا جین (Triticum aestivum) DELLA (Rht-B1b)57 کو فاسفوریلیٹ کر سکتا ہے، حالانکہ GSK3 کے ذریعے Rht-B1b کی فاسفوریلیشن کی تصدیق نہیں ہوئی ہے۔ GSK3 کی موجودگی میں ان وٹرو انزیمیٹک رد عمل کے بعد ماس سپیکٹرو میٹری تجزیہ نے Rht-B1b کے DELLA اور GRAS ڈومینز کے درمیان واقع تین فاسفوریلیشن سائٹس کا انکشاف کیا (ضمنی شکل 3)۔ تینوں فاسفوریلیشن سائٹس پر سیرین سے الانائن متبادلات کے نتیجے میں ٹرانسجینک گندم میں Rht-B1b کی سرگرمی میں کمی واقع ہوئی، ہمارے ان نتائج سے مطابقت رکھتی ہے کہ Pep2 RGA میں الانائن کے متبادل نے RGA سرگرمی کو کم کیا۔ تاہم، وٹرو پروٹین کے انحطاط کے اسیس نے مزید یہ ظاہر کیا کہ فاسفوریلیشن Rht-B1b57 کو بھی مستحکم کر سکتا ہے۔ یہ ہمارے نتائج کے برعکس ہے جس سے ظاہر ہوتا ہے کہ Pep2 RGA میں الانائن متبادل پلانٹا میں اس کے استحکام کو تبدیل نہیں کرتے ہیں۔ گندم میں GSK3 Arabidopsis 57 میں brassinosteroid-insensitive protein 2 (BIN2) کا آرتھولوج ہے۔ BIN2 BR سگنلنگ کا ایک منفی ریگولیٹر ہے، اور BR BIN2 کے انحطاط 58 کا سبب بن کر اپنے سگنلنگ پاتھ وے کو چالو کرتا ہے۔ ہم نے دکھایا کہ RGA BR کے علاج سے سٹافو کی سطح میں کمی نہیں ہوتی ہے عربیڈوپسس (ضمنی شکل 2)، تجویز کرتا ہے کہ BIN2 کے ذریعہ RGA کے فاسفوریلیٹ ہونے کا امکان نہیں ہے۔
تمام مقداری اعداد و شمار کا شماریاتی طور پر ایکسل کا استعمال کرتے ہوئے تجزیہ کیا گیا، اور طالب علم کے ٹی ٹیسٹ کا استعمال کرتے ہوئے اہم فرق کا تعین کیا گیا۔ نمونے کے سائز کا پہلے سے تعین کرنے کے لیے کوئی شماریاتی طریقہ استعمال نہیں کیا گیا تھا۔ تجزیہ سے کوئی ڈیٹا خارج نہیں کیا گیا تھا۔ تجربہ بے ترتیب نہیں تھا؛ اور محققین تجربے اور نتائج کی تشخیص کے دوران مختص سے آگاہ تھے۔ نمونے کے سائز فگر لیجنڈز اور خام ڈیٹا فائلوں میں فراہم کیے گئے ہیں۔
پوسٹ ٹائم: اپریل 15-2025