یہ مطالعہ ظاہر کرتا ہے کہ rhizosphere symbiotic fungus *Kosakonia oryziphila* NP19 چاول کی جڑوں سے الگ تھلگ ایک امید افزا پودوں کی نشوونما کو فروغ دینے والا بایو کیڑے مار دوا اور *Pyricularia oryzae* کی وجہ سے چاول کے دھماکے پر قابو پانے کے لیے بائیو کیڑے مار دوا ہے۔ کھاؤ ڈاک مالی 105 (KDML105) قسم کے جیسمین چاول کے پودوں کے تازہ پتوں پر ان وٹرو تجربات کیے گئے۔ نتائج سے ظاہر ہوا کہ NP19 نے *Pyricularia oryzae* conidia کے انکرن کو مؤثر طریقے سے روک دیا۔ *Pyricularia oryzae* انفیکشن تین مختلف علاج کے حالات کے تحت روکا گیا تھا: سب سے پہلے، چاول کو NP19 کے ساتھ نوآبادیاتی بنایا گیا تھا اور *Pyricularia oryzae* conidia کے ساتھ ٹیکہ لگایا گیا تھا؛ دوسرا، NP19 اور *Pyricularia oryzae* conidia کا مرکب پتوں پر لگایا گیا تھا۔
rhizosphere بیکٹیریم *Kosakonia oryziphila* NP1914چاول کی جڑوں سے الگ تھلگ تھا (*Oryza sativa* L. cv. RD6)۔ *Kosakonia oryziphila* NP19 میں پودوں کی نشوونما کو فروغ دینے والی خصوصیات ہیں، بشمول نائٹروجن کا تعین، انڈولیسیٹک ایسڈ (IAA) کی پیداوار، اور فاسفیٹ حل کرنا۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ *Kosakonia oryziphila* NP19 chitinase پیدا کرتا ہے۔14.*کوساکونیا اوریزیفیلا* NP19 کو KDML105 چاول کے بیجوں پر لگانے سے چاول کے دھماکے کے انفیکشن کے بعد چاول کی بقا بہتر ہوتی ہے۔ اس مطالعے کا مقصد (i) چاول کے دھماکے کے خلاف *Kosakonia oryziphila* NP19 کے روکنے والے طریقہ کار کو واضح کرنا اور (ii) چاول کے دھماکے کو کنٹرول کرنے میں *Kosakonia oryziphila* NP19 کے اثر کی تحقیقات کرنا ہے۔
غذائی اجزاء پودوں کی نشوونما اور نشوونما میں ایک اہم کردار ادا کرتے ہیں، جو مختلف مائکروبیل بیماریوں کو کنٹرول کرنے والے عوامل کے طور پر کام کرتے ہیں۔ ایک پودے کی معدنی غذائیت اس کی بیماری کے خلاف مزاحمت، مورفولوجیکل یا بافتوں کی خصوصیات، اور وائرس، یا پیتھوجینز کے خلاف زندہ رہنے کی صلاحیت کا تعین کرتی ہے۔ فاسفورس فینولک مرکبات کی ترکیب کو بڑھا کر نشوونما کو سست کر سکتا ہے اور چاول کے دھماکے کی شدت کو کم کر سکتا ہے۔ پوٹاشیم عام طور پر چاول کی بہت سی بیماریوں کے واقعات کو کم کرتا ہے، جیسے کہ چاول کے دھماکے، بیکٹیریل لیف اسپاٹ، لیف شیتھ اسپاٹ، تنے کی سڑنا، اور پتوں کا دھبہ۔ پیریناؤڈ کی ایک تحقیق سے معلوم ہوا ہے کہ زیادہ پوٹاشیم والی کھاد چاول کی کوکیی بیماریوں کے واقعات کو بھی کم کر سکتی ہے اور پیداوار میں اضافہ کر سکتی ہے۔ متعدد مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ گندھک کی کھاد کوکیی پیتھوجینز کے خلاف فصل کی مزاحمت کو بہتر بنا سکتی ہے۔27اضافی میگنیشیم (کلوروفیل کا ایک جزو) چاول کے دھماکے کا باعث بن سکتا ہے۔21زنک براہ راست پیتھوجینز کو مار سکتا ہے، اس طرح بیماری کی شدت کو کم کر سکتا ہے۔22فیلڈ ٹرائلز سے پتہ چلتا ہے کہ اگرچہ کھیت کی مٹی میں فاسفورس، پوٹاشیم، سلفر اور زنک کی مقدار برتن کے تجربے سے زیادہ تھی، پھر بھی چاول کا دھماکہ چاول کے پتوں سے پھیلتا ہے۔ مٹی کے غذائی اجزاء چاول کے دھماکے کو کنٹرول کرنے میں زیادہ موثر نہیں ہو سکتے، کیونکہ نسبتاً نمی اور درجہ حرارت مضبوط روگزنق کی افزائش کے لیے ناگوار ہیں۔
فیلڈ ٹرائلز میں، تمام علاجوں میں Stenotrophomonas maltophilia، P. dispersa، Xanthomonas sacchari، Burkholderia multivorans، Burkholderia diffusa، Burkholderia vietnamiensis اور C. gleum کا پتہ چلا۔ سٹینوٹروفوموناس مالٹوفیلیا کو گندم، جئی، ککڑی، مکئی اور آلو کے ریزوسفیئر سے الگ کر دیا گیا ہے اور اس نے بائیو کنٹرول دکھایا ہے۔سرگرمیColletotrichum nymphaeae کے خلاف.کی سڑمزید برآں، Xanthomonas sacchari کے R1 تناؤ نے چاول کے دھماکے اور برکھولڈیریا کی وجہ سے ہونے والے پانیکل سڑنے کے خلاف مخالفانہ سرگرمی ظاہر کی ہے۔glumae.30Burkholderia oryzae NP19 انکرن کے دوران چاول کے بافتوں کے ساتھ ایک علامتی تعلق قائم کر سکتا ہے اور چاول کی کچھ اقسام کے لیے ایک مقامی علامتی فنگس بن سکتا ہے۔ جب کہ مٹی کے دیگر بیکٹیریا پیوند کاری کے بعد چاول کو نوآبادیات بنا سکتے ہیں، دھماکے کی فنگس NP19، جو ایک بار نوآبادی ہو جاتی ہے، اس بیماری کے خلاف چاول کے دفاعی طریقہ کار میں متعدد عوامل کو متاثر کرتی ہے۔ NP19 نہ صرف P. oryzae کی نشوونما کو 50% سے زیادہ روکتا ہے (آن لائن اپینڈکس میں ضمنی جدول S1 دیکھیں)، بلکہ پتوں پر دھماکے کے گھاووں کی تعداد کو بھی کم کرتا ہے اور NP19 (RBf، RFf-B-3) اور RBF کے ساتھ نوآبادیاتی چاول کی پیداوار میں اضافہ کرتا ہے۔
فنگس Pyricularia oryzae، جو پودے کے دھماکے کا سبب بنتی ہے، ایک ہیمٹروفک فنگس ہے جسے انفیکشن کے دوران میزبان پودے سے غذائی اجزاء کی ضرورت ہوتی ہے۔ پودے فنگل انفیکشن کو دبانے کے لیے ری ایکٹو آکسیجن اسپیسز (ROS) پیدا کرتے ہیں۔ تاہم، Pyricularia oryzae میزبان کی طرف سے تیار کردہ ROS کا مقابلہ کرنے کے لیے مختلف حکمت عملیوں کا استعمال کرتا ہے۔31پیرو آکسیڈیز روگزن کی مزاحمت میں اپنا کردار ادا کرتے دکھائی دیتے ہیں، جس میں سیل وال پروٹینز کو آپس میں جوڑنا، زائلم کی دیواروں کا گاڑھا ہونا، ROS کی پیداوار، اور ہائیڈروجن پیرو آکسائیڈ کو بے اثر کرنا شامل ہیں۔32اینٹی آکسیڈینٹ انزائمز ایک مخصوص ROS سکیوینگ سسٹم کے طور پر کام کر سکتے ہیں۔ اپنی اینٹی آکسیڈینٹ خصوصیات کے ذریعے، سپر آکسائیڈ ڈسمیوٹیز (SOD) اور پیرو آکسیڈیس (POD) دفاعی ردعمل شروع کرنے میں مدد کرتے ہیں، SOD دفاع کی پہلی لائن کے طور پر کام کرتے ہیں۔33چاول میں، پلانٹ پیرو آکسیڈیز کی سرگرمی پودوں کے پیتھوجینز جیسے *Pyricularia oryzae* اور *Xanthomonas oryzae pv کے انفیکشن کے بعد پیدا ہوتی ہے۔ اوریزا*۔32اس مطالعے میں، نوآبادیاتی اور/یا *Magnaporthe oryzae* NP19 کے ساتھ ٹیکہ لگائے گئے چاولوں میں پیرو آکسیڈیز کی سرگرمی بڑھ گئی۔ تاہم، *Magnaporthe oryzae* نے پیرو آکسیڈیز کی سرگرمی کو متاثر نہیں کیا۔ سپر آکسائیڈ ڈسمیوٹیز (SOD)، بطور H₂O₂ synthase، O₂⁻ کی H₂O₂ میں کمی کو اتپریرک کرتا ہے۔ SOD پودے کے اندر H₂O₂ کے ارتکاز کو متوازن کر کے مختلف تناؤ کے خلاف پودوں کی مزاحمت میں اہم کردار ادا کرتا ہے، اس طرح پودوں کے مختلف دباؤ کے لیے رواداری کو بڑھاتا ہے۔ اس مطالعے میں، برتن کے تجربے میں، *Magnaporthe oryzae* ٹیکہ لگانے کے 30 دن بعد (30 DAT)، RF اور RBF گروپس میں SOD سرگرمیاں R گروپ کے مقابلے بالترتیب 121.9% اور 104.5% زیادہ تھیں، جو *Magnaporthe oryzae* انفیکشن کے لیے SOD ردعمل کی نشاندہی کرتی ہیں۔ برتن اور کھیت دونوں تجربات میں، *Magnaporthe oryzae* NP19-inoculated چاولوں میں SOD سرگرمیاں ٹیکہ لگانے کے 30 دن بعد بالترتیب 67.7% اور uninoculated چاولوں کے مقابلے میں 28.8% زیادہ تھیں۔ پودوں کے حیاتیاتی کیمیائی ردعمل ماحول، تناؤ کے منبع، اور پودوں کی قسم³⁵ سے متاثر ہوتے ہیں۔ پودوں کے اینٹی آکسیڈینٹ انزائم کی سرگرمیاں ماحولیاتی عوامل سے براہ راست متاثر ہوتی ہیں، جس کے نتیجے میں پودے کے مائکروبیل کمیونٹی کو تبدیل کرکے پودوں کے اینٹی آکسیڈینٹ انزائم کی سرگرمیوں کو متاثر کیا جاتا ہے۔
اس تحقیق میں استعمال ہونے والی چاول کے دھماکے کی بیماری (Kosakonia oryziphila NP19, NCBI الحاق نمبر PP861312) تناؤ تھا۔13تھائی لینڈ کے صوبہ ناکھون فانوم میں چاول کی فصل RD6 کی جڑوں سے الگ تھلگ (16° 59′ 42.9″ N 104° 22′ 17.9″ E)۔ اس تناؤ کو غذائی اجزاء کے شوربے (NB) میں 30 ° C اور 150 rpm پر 18 گھنٹے کے لیے تیار کیا گیا تھا۔ بیکٹیریل ارتکاز کا حساب لگانے کے لیے، 600 nm پر بیکٹیریل معطلی کی جاذبیت کی پیمائش کی گئی۔ بیکٹیریل معطلی کی حراستی کو ایڈجسٹ کیا گیا تھا۔10⁶CFU/mL جراثیم سے پاک ڈیونائزڈ پانی کے ساتھ (dH₂O)۔ چاول کے دھماکے والی فنگس (پائریکولیریا اوریزا) کو آلو ڈیکسٹروز ایگر (PDA) پر اسپاٹ ٹیکہ لگایا گیا تھا اور 25 ° C پر 7 دن تک انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ فنگل مائسیلیم کو چاول کی چوکر ایگر میڈیم (2% (w/v) چاول کی چوکر، 0.5% (w/v) سوکروز، اور 2% (w/v) آگر کو deionized پانی میں تحلیل کیا گیا، pH 7) اور 25 ° C پر 7 دن تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ ایک حساس چاول کی فصل (KDML105) کی جراثیم سے پاک پتی کو کونڈیا پیدا کرنے کے لیے مائسیلیم پر رکھا گیا تھا اور مشترکہ UV اور سفید روشنی کے تحت 5 دن کے لیے 25°C پر انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ کونیڈیا کو مائسیلیم اور متاثرہ پتوں کی سطح کو 10 ملی لیٹر جراثیم سے پاک 0.025٪ (v/v) ٹوین 20 محلول کے ساتھ آہستہ سے صاف کرکے جمع کیا گیا۔ فنگل محلول کو پنیر کی آٹھ تہوں کے ذریعے فلٹر کیا گیا تاکہ مائیسیلیم، آگر اور چاول کے پتوں کو ہٹایا جا سکے۔ مزید تجزیہ کے لیے سسپنشن میں کونیڈیا کا ارتکاز 5 × 10⁵ conidia/ml میں ایڈجسٹ کیا گیا۔
کوساکونیا اوریزیفیلا NP19 خلیوں کی تازہ ثقافتیں NB میڈیم میں 37 ° C پر 24 گھنٹے کے لیے کلچر کر کے تیار کی گئیں۔ سینٹرفیوگریشن (3047 × g، 10 منٹ) کے بعد، سیل گولی جمع کی گئی، 10 ایم ایم فاسفیٹ بفرڈ نمکین (PBS، pH 7.2) کے ساتھ دو بار دھویا گیا، اور اسی بفر میں دوبارہ معطل کر دیا گیا۔ سیل معطلی کی نظری کثافت 600 nm پر ماپا گیا، جس کی قدر تقریباً 1.0 (1.0 × 10⁷ CFU/μl کے مساوی ہے جو کہ غذائی اجزا کی پلیٹوں پر چڑھانے سے طے کی گئی ہے)۔ P. oryzae کے Conidia کو PBS محلول میں معطل کر کے اور ہیمو سائیٹومیٹر کا استعمال کرتے ہوئے گن کر حاصل کیا گیا۔ *K کی معطلی۔ oryziphila* NP19 اور *P. لیف سمیر کے تجربات کے لیے، K. oryziphila* conidia کو چاول کے تازہ پتوں پر بالترتیب 1.0 × 10⁷ CFU/μL اور 5.0 × 10² conidia/μL کے ارتکاز میں تیار کیا گیا تھا۔ چاول کے نمونے کی تیاری کا طریقہ مندرجہ ذیل تھا: چاول کے بیجوں سے 5 سینٹی میٹر لمبے پتوں کو کاٹ کر پیٹری ڈشز میں رکھا گیا جس میں گیلے جاذب کاغذ کے ساتھ قطار میں رکھی گئی۔ علاج کے پانچ گروپ قائم کیے گئے: (i) R: چاول کے پتے بغیر بیکٹیریل ٹیکے کے کنٹرول کے طور پر، 0.025% (v/v) Tween 20 محلول کے ساتھ ضمیمہ؛ (ii) RB + F: چاول کو K. oryziphila NP19 کے ساتھ ٹیکہ لگایا گیا، چاول کے دھماکے کا باعث بننے والی فنگس کے 2 μL کونڈیا معطلی کے ساتھ ضمیمہ؛ (iii) R + BF: گروپ R میں چاول 4 μl بلاسٹ فنگل کونیڈیا سسپنشن اور K. oryziphila NP19 (حجم کا تناسب 1:1) کے مرکب کے ساتھ ضمیمہ کرتا ہے۔ (iv) R + F: گروپ R میں چاول 2 μl بلاسٹ فنگل کونیڈیا سسپنشن کے ساتھ ضمیمہ؛ (v) RF + B: گروپ R میں چاول کو 2 μl بلاسٹ فنگل کونیڈیا سسپنشن کے ساتھ 30 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا، اور پھر اسی جگہ پر K. oryziphila NP19 کے 2 μl شامل کیے گئے۔ تمام پیٹری ڈشز کو اندھیرے میں 25 ° C پر 30 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا اور پھر مسلسل روشنی میں رکھا گیا۔ ہر گروپ کو سہ رخی میں تشکیل دیا گیا تھا۔ ثقافت کے 72 گھنٹے کے بعد، الیکٹران مائکروسکوپی (SEM) کو اسکین کرکے پودوں کے ٹشوز کا مشاہدہ اور تجزیہ کیا گیا۔ مختصراً، پودوں کے ٹشوز کو فاسفیٹ بفر میں طے کیا گیا تھا جس میں 2.5% (v/v) glutaraldehyde تھے اور ایتھنول کے حل کی ایک سیریز کے ذریعے پانی کی کمی کی گئی تھی۔ کاربن ڈائی آکسائیڈ کے ساتھ کریٹیکل پوائنٹ خشک ہونے کے بعد، نمونوں کو سونے کے ساتھ تھوک دیا گیا اور آخر میں اسکیننگ الیکٹران مائکروسکوپ کا استعمال کرتے ہوئے جانچا گیا۔15
پوسٹ ٹائم: دسمبر-15-2025