کیڑے مار ادویات عالمی خوراک کی قلت کو دور کرنے اور ویکٹر سے پیدا ہونے والی انسانی بیماریوں سے نمٹنے میں اہم کردار ادا کرتی ہیں۔ تاہم، کیڑے مار ادویات کے خلاف مزاحمت کے بڑھتے ہوئے مسئلے کے لیے فوری طور پر نئے مرکبات کی دریافت کی ضرورت ہے جو کم استعمال شدہ اہداف کو نشانہ بناتے ہیں۔ کیڑوں کے عارضی رسیپٹر پوٹینشل (TRPV) چینلز—Nanzhong (Nan) اور غیر فعال (Iav) — ہیٹرولوگس چینلز (Nan-Iav) تشکیل دے سکتے ہیں اور میکانوسینسری اعضاء کو مقامی بنا سکتے ہیں جو کیڑوں میں جیوٹروپزم، سماعت اور پروپریوپشن میں ثالثی کرتے ہیں۔ کچھ کیڑے مار دوائیں، جیسے کہ aphidopyrrolidone (AP)، نامعلوم میکانزم کے ذریعے Nan-Iav کو نشانہ بناتے ہیں۔ اے پی چھیدنے والے کیڑوں (ہیمپٹیران) کے خلاف موثر ہے، فلیمینٹس کے کام میں خلل ڈال کر کھانا کھلانے سے روکتا ہے۔ اے پی صرف نان کا پابند ہوسکتا ہے، لیکن صرف Nan-Iav ہی ایگونسٹس کے ساتھ بات چیت کرسکتا ہے، بشمول اینڈوجینس نیکوٹینامائڈ (NAM)، اس طرح چینل کی سرگرمی کو ظاہر کرتا ہے۔ کیڑے مار دوا کے ہدف کے طور پر Nan-Iav کی صلاحیت کے باوجود، اس کے چینل اسمبلی، ریگولیٹری بائنڈنگ سائٹس، اور Ca2+ پر منحصر ریگولیشن کے بارے میں بہت کم معلومات ہیں، جو مزید کیڑے مار دوا کی نشوونما میں رکاوٹ ہیں۔ اس مطالعے میں، کریو الیکٹران مائیکروسکوپی کا استعمال کیلموڈولن-لیگینڈ سے پاک حالت میں ہیمپٹیرا کیڑوں میں Nan-Iav کی ساخت کا تعین کرنے کے لیے کیا گیا تھا، اسی طرح اینکیرین ریپیٹ سائٹوپلاسمک ڈومین (ARD) کی حدود میں AP اور NAM کے ساتھ۔ حیرت انگیز طور پر، ہم نے پایا کہ نان پروٹین خود ایک پینٹامر بنا سکتا ہے، جو اے پی کی ثالثی اے آر ڈی تعاملات کے ذریعے مستحکم ہوتا ہے۔ یہ مطالعہ کیڑے مار ادویات اور ایگونسٹ اور نان آئی اے وی کے درمیان مالیکیولر تعاملات کو ظاہر کرتا ہے، چینل کے فنکشن اور اسمبلی میں اے آر ڈی کی اہمیت کو اجاگر کرتا ہے، اور Ca2+ ریگولیشن کے طریقہ کار کو تلاش کرتا ہے۔
بڑھتی ہوئی شدید عالمی موسمیاتی تبدیلی کے پس منظر میں، بگڑتی ہوئی عالمی غذائی تحفظ 21 ویں صدی کے بڑے چیلنجوں میں سے ایک ہے، جس کے معاشرے کے لیے سنگین نتائج ہیں۔1,2ورلڈ ہیلتھ آرگنائزیشن کی اسٹیٹ آف فوڈ سیکیورٹی اینڈ نیوٹریشن ان دی ورلڈ 2023 (SOFI) کی رپورٹ کا تخمینہ ہے کہ دنیا بھر میں تقریباً 2.33 بلین لوگ اعتدال سے لے کر شدید غذائی عدم تحفظ کا شکار ہیں، یہ ایک دیرینہ مسئلہ ہے۔3،4بدقسمتی سے، ایک اندازے کے مطابق سالانہ 20% سے 30% یا اس سے زیادہ فصل کی پیداوار کیڑوں اور پیتھوجینز کی وجہ سے ضائع ہو جاتی ہے، اور گلوبل وارمنگ سے کیڑوں کے خلاف مزاحمت اور فصل کے خطرے کو بڑھانے کی توقع کی جاتی ہے۔4،5،6،7،8کیڑے مار ادویات کی نشوونما نہ صرف فصلوں کو کیڑوں سے بچانے اور ویکٹر سے پیدا ہونے والے پیتھوجینز کے پھیلاؤ کو کم کرنے کے لیے اہم ہے، بلکہ ویکٹر سے پیدا ہونے والی انسانی بیماریوں جیسے ڈینگی بخار، ملیریا، اور چاگاس بیماری سے لڑنے کے لیے بھی اہم ہے، جو کیڑے مار ادویات کے خلاف تیزی سے مزاحم ہیں۔5،9،10،11
نیوروٹوکسک کیڑے مار ادویات کے بڑے اہداف میں سے، ہیٹروٹیٹرامریک ٹی آر پی وی چینل نانچنگ (نان) غیر فعال (آئی اے وی) صرف پچھلی دہائی میں دریافت ہونے والے حشرات کش اہداف کی ایک کلاس کی نمائندگی کرتا ہے، جس میں تجارتی طور پر دستیاب کیڑے مار ادویات جیسے امیڈاکلوپریڈ اور پائراکلوسٹروبن شامل ہیں۔12،13،14نیم مصنوعی کیڑے مار دوا aphidopyrolifen (AP) حال ہی میں تیار کی گئی اور تجارتی مصنوعات ہے جس کا بنیادی جزو فعال کیڑے مار دوا Inscalis® ہے، جو AP کو سبنانومولر سرگرمی کی سطح پر باندھتا ہے۔15AP پولینیٹرز، فائدہ مند کیڑوں، اور دیگر غیر ہدف والے جانداروں کے لیے کم شدید زہریلا کی نمائش کرتا ہے، اور جب لیبل کی ہدایات کے مطابق استعمال کیا جاتا ہے، تو یہ دیگر کیڑے مار ادویات کے خلاف مزاحمتی دباؤ کو کم کر سکتا ہے۔16,17,18Nan اور Iav بڑے پیمانے پر حشرات کی انواع میں تقسیم ہوتے ہیں، ان کا اظہار صرف اینٹینا اور اعضاء کے کورڈل اسٹریچ ریسیپٹر نیوران میں ہوتا ہے، اور یہ سماعت، کشش ثقل کے ادراک، اور پروپریوسیپشن کے لیے اہم ہیں۔13,16,19,20,21,22AP، imidacloprid، اور pyraclostrobin ایک منفرد طریقہ کار کے ذریعے Nan-Iav کمپلیکس کو متحرک کرتے ہیں، بالآخر proprioceptive سگنل کی منتقلی کو روکتے ہیں۔13،16،23چھیدنے والے کیڑوں (ہیمپٹیران) جیسے افڈس اور سفید مکھیوں میں، پروپریو سیپشن کا نقصان ان کی خوراک کی صلاحیت کو متاثر کرتا ہے، جو بالآخر موت کا باعث بنتا ہے۔13,24دلچسپ بات یہ ہے کہ، AP Nan-Iav کمپلیکس کے لیے اعلی وابستگی اور اکیلے Nan کے لیے کم وابستگی کا مظاہرہ کرتا ہے۔ AP کو Nan-Iav سے بائنڈنگ کرنے سے برقی رو پیدا ہوتا ہے، لیکن اکیلے Nan سے منسلک ہونا چینل کی سرگرمی کو متحرک نہیں کرتا ہے۔ Iav بذات خود AP کا پابند نہیں ہے۔16اس سے پتہ چلتا ہے کہ Nan اور Iav مختلف Nan-Iav چینل کمپلیکس بنانے کے لیے پابند ہو سکتے ہیں (مثال کے طور پر، مختلف stoichiometric تناسب کے ساتھ یا ایک ہی stoichiometric تناسب کے اندر مختلف انتظامات) یا یہ کہ AP متعدد سائٹس سے منسلک ہو سکتا ہے۔ مزید برآں، نیچرل ایگونسٹ نیکوٹینامائڈ (NAM) ڈروسوفلا نان-آئیو کو مائکرو مولر وابستگی کے ساتھ جوڑتا ہے، جو وٹرو میں ایفڈز (اے پی) کے اثرات کو ظاہر کرتا ہے۔16,25اور افیڈ کی افزائش اور خوراک کو روکنا، بالآخر ان کی موت کا باعث بنتا ہے۔25,26. یہ اعداد و شمار بہت سے سوالات کو جنم دیتے ہیں۔ مثال کے طور پر، یہ ابھی تک واضح نہیں ہے کہ Nan-Iav heterodimer کیسے بنتا ہے، کونسی بائنڈنگ سائٹس کو چھوٹے مالیکیولز کو ماڈیول کرنے کے لیے استعمال کیا جاتا ہے، اور یہ چھوٹے مالیکیول کس طرح proprioception کو دبا کر چینل کے کام کو منظم کرتے ہیں۔ مزید برآں، وہ وجوہات کیوں کہ نان خود غیر فعال ہے اور اس کا AP سے کم وابستگی ہے، جبکہ Nan-Iav heterodimer فعال ہے اور AP کو اعلی وابستگی کے ساتھ باندھتا ہے، یہ واضح نہیں ہے۔ آخر میں، Nan-Iav فنکشن کے Ca2+ پر منحصر ریگولیشن کے بارے میں بہت کم معلوم ہے اور یہ کہ یہ نیورونل سگنلنگ کے عمل میں کیسے ضم ہوتا ہے۔. 13,21
اس مطالعہ میں، کرائیو الیکٹران مائکروسکوپی، الیکٹرو فزیالوجی، اور ریڈیولیگینڈ بائنڈنگ تکنیکوں کو ملا کر، ہم نے Nan-Iav کی اسمبلی اور اس کے چھوٹے مالیکیول ریگولیٹرز سے منسلک ہونے کے طریقہ کار کو واضح کیا۔ مزید برآں، ہم نے Iav اور AP-مستحکم نان پینٹامرز کو جزوی طور پر پابند کیلموڈولن (CaM) کا پتہ لگایا۔ یہ نتائج چینلز، چینل اسمبلی، اور لیگنڈ بائنڈنگ وابستگی کا تعین کرنے والے عوامل میں کیلشیم آئنوں کے ضابطے میں اہم بصیرت فراہم کرتے ہیں۔ زیادہ اہم بات یہ ہے کہ ہم نے تصدیق کی کہ اے آر ڈی ان عملوں میں مرکزی کردار ادا کرتا ہے۔ مکمل کیڑوں کے چینلز کا ہمارا مطالعہ متعلقہ زرعی کیڑے مار ادویات سے منسلک ہے۔27، 28، 29کیڑے مار ادویات کی صنعت کی ترقی کے امکانات کو کھولتا ہے، کیڑے مار ادویات کی افادیت اور مخصوصیت کو بہتر بناتا ہے، اور عالمی خوراک کی حفاظت اور ویکٹر سے پیدا ہونے والی بیماریوں کے پھیلاؤ سے نمٹنے کے لیے TRPV کے ہدف والے مرکبات کو دیگر پرجاتیوں پر لاگو کرنے کے قابل بناتا ہے۔
ہم نے یہ بھی پایا کہ Nan-Iav کو Ca2+ کے ذریعے ریگولیٹ کیا جاتا ہے، اور ریگولیشن کا طریقہ کار جزوی طور پر پابند CaM کے ذریعے ثالثی کرتا ہے۔ اہم بات یہ ہے کہ، CaM کے ذریعے Nav کا یہ Ca2+ پر منحصر ریگولیشن دوسرے آئن چینلز (جیسے وولٹیج گیٹڈ Na+ چینلز اور TRPV5/6 چینلز) کے ریگولیشن کے طریقہ کار سے نمایاں طور پر مختلف ہے۔52,53,54,55,56,57. Nav1.2 چینل میں، CaM کا C-ٹرمینل ڈومین ہیلی طور پر C-ٹرمینل ڈومین (CTD) کے ساتھ منسلک ہوتا ہے، اور Ca2+ اس کے N-ٹرمینل ڈومین کو CTD کے دور دراز حصے سے منسلک کرتا ہے۔56. TRPV5/6 چینل میں، CaM کا C-ٹرمینل ڈومین CTH سے منسلک ہوتا ہے، اور Ca2+ اس کے N-ٹرمینل ڈومین کو سوراخ میں اوپر کی طرف بڑھاتا ہے، اس طرح کیشن پارگمیتا کو روکتا ہے۔53,54. ہم Nan-Iav-CaM (تصویر 4h) کے Ca2+-ریگولیٹڈ فنکشن کے لیے ایک ماڈل تجویز کرتے ہیں۔ اس ماڈل میں، CaM کا N-ٹرمینل ڈومین بنیادی طور پر Iav کے C-ٹرمینل ڈومین (CTH) سے منسلک ہوتا ہے۔ آرام کی حالت میں (کم [Ca2+] ارتکاز)، CaM کا C-ٹرمینل ڈومین نان کے ساتھ تعامل کرتا ہے، ARD کی تشکیل کو مستحکم کرتا ہے اور اس طرح چینل کھولنے کو فروغ دیتا ہے۔ چینل پر ایک ایگونسٹ/کیڑے مار دوا کا پابند ہونا تاکوں کو کھولنے پر اکساتا ہے، جس سے Ca2+ کی آمد ہوتی ہے۔ Ca2+ پھر CaM سے منسلک ہوتا ہے، جس کی وجہ سے C-ٹرمینل ڈومین نان کے ARD سے الگ ہوجاتا ہے۔ چونکہ CaM بائنڈنگ کو مسدود کرنا Ca2+ کے روکے ہوئے اثر کو بنیادی طور پر ختم کر دیتا ہے، اس لیے یہ علیحدگی ARD کی نقل و حرکت کو ماڈیول کرتی ہے، جس سے Ca2+ پر منحصر روکنا یا غیر حساسیت پیدا ہوتی ہے۔ کیلشیم آئن کے اخراج (تصویر 4 جی) کے بعد چینل کرنٹ کی تیزی سے بحالی سے پتہ چلتا ہے کہ یہ طریقہ کار Ca2+ ثالثی نیورونل سگنلز کے لیے تیزی سے ردعمل کی سہولت فراہم کرتا ہے۔ مزید برآں، Iav کا سی ٹرمینل خطہ، جو ابھی تک بُری طرح سمجھ نہیں پا رہا ہے، چینل کو ہدف بنانے اور موجودہ ضابطے میں دیگر کردار ادا کرنے کی اطلاع دی گئی ہے۔
آخر میں، ہمارا مطالعہ زرعی اہمیت کے حامل کیڑے مار دوا-کیڑے مار دوا TRP چینل کمپلیکس کے اعلی ریزولوشن ڈھانچے کو پیش کرتا ہے — ایک ایسی دریافت جو پہلے ہمارے لیے نامعلوم تھی۔ خاص طور پر، ہم نے کیڑوں کے خلیوں کی بجائے انسانی خلیات (HEK293S GnTi–) میں کیڑوں کے چینل کی ساخت اور کام کو نمایاں کیا۔ کیڑے مار ادویات کی بڑھتی ہوئی مزاحمت اور خوراک کی حفاظت اور پیتھوجینز پر جاری دباؤ کے پیش نظر، ہمارا کام اہم معلومات فراہم کرتا ہے جو انسانی صحت اور عالمی غذائی تحفظ کے فائدے کے لیے نئی کیڑے مار ادویات کی تیاری میں سہولت فراہم کرے گی۔ مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ AP جیسے کیڑے مار دوائیں کچھ کیڑوں کے خلاف موثر ہوتی ہیں جب لیبل کی ہدایات کے مطابق استعمال کی جاتی ہیں اور فائدہ مند پولینٹرز کے لیے کم شدید زہریلا ہوتے ہیں، جو ان کے ماحولیاتی تحفظ کو ظاہر کرتے ہیں۔13,16مزید برآں، مچھروں پر کچھ AP مشتقات کی جانچ سے یہ ظاہر ہوا ہے کہ وہ آخر کار اڑنے کی اپنی صلاحیت کھو دیتے ہیں۔ یہ سمجھنا کہ یہ ماڈیولنگ مرکبات Nan-Iav سے کیسے منسلک ہوتے ہیں موجودہ مرکبات میں ترمیم یا زیادہ موثر اور نئے مرکبات کی نشوونما میں سہولت فراہم کریں گے۔عین مطابقکیڑوں کا کنٹرول. ہمارا مطالعہ یہ ظاہر کرتا ہے کہ Nan-Iav ARD انٹرفیس نہ صرف endogenous مرکبات، کیڑے مار ادویات، اور Ca2+-CaM کی سرگرمی کو منظم کرنے کے لیے بلکہ چینل اسمبلی کے لیے بھی اہم ہے۔ ہم تجویز کرتے ہیں کہ چھوٹے انووں کے ساتھ ہیٹروڈیمر اسمبلی میں خلل ڈالنا آئن چینل روکنے والوں کو تیار کرنے کے لئے ایک انوکھا اور امید افزا نقطہ نظر ہوسکتا ہے۔
آٹھ آرتھولوجس جینز میں سے، براؤن بیٹل (ہیلیومورفا ہیلیس) نانچنگ اور غیر فعال کے مکمل طوالت والے جینز کا انتخاب کیا گیا، جو ڈٹرجنٹ میں بہترین استحکام کا مظاہرہ کرتے ہیں۔ ترکیب شدہ جین انسانی اظہار کے لیے کوڈن کے مطابق بنائے گئے تھے اور XhoI اور EcoRI پابندی والی سائٹس کا استعمال کرتے ہوئے pBacMam pCMV-DEST ویکٹر (لائف ٹیکنالوجیز) میں کلون کیے گئے تھے۔ اس نے اس بات کو یقینی بنایا کہ کلون C-ٹرمینل GFP-FLAG-10xHis اور mCherry-FLAG-10xHis ٹیگز کے ساتھ فریم میں تھے، جنہیں HRC-3C پروٹیز (PPX) کے ذریعے صاف کیا جاتا ہے، جو آزادانہ اجازت دیتا ہے۔اظہار. نانچنگ اور غیر فعال کو pBacMam ویکٹر میں کلون کرنے کے لیے استعمال ہونے والے پرائمر حسب ذیل تھے:
انفرادی ذرات کی مائیکروسکوپک تصاویر ٹائٹن کریوس G2 ٹرانسمیشن الیکٹران مائیکروسکوپ (FEI) پر حاصل کی گئیں جو K3 کیمرے اور ایک Gatan BioQuantum انرجی فلٹر سے لیس تھیں۔ مائکروسکوپ 300 keV پر چلائی گئی تھی، جس میں 20 eV کی توانائی کی ترتیب، 1.08 Å/pixel کا ایک نمونہ پکسل سائز (81,000x کا برائے نام اضافہ)، اور -0.8 سے -2.2 μm تک کا ایک ڈیفوکس گریڈینٹ تھا۔ 25 e–px−1 s−1 کی برائے نام خوراک کی شرح، 2.4 s کی نمائش کا وقت، اور تقریباً 60 e–Å−2 کی کل خوراک کے ساتھ Latitude S مائکروسکوپ (Gatan) کا استعمال کرتے ہوئے ویڈیو ریکارڈنگ 40 فریم فی سیکنڈ پر کی گئی۔
موشن کور 2 کا استعمال کرتے ہوئے فلم پر بیم انڈسڈ موشن کریکشن اور ڈوز ویٹنگ RELION 4.061 میں کی گئی۔ کنٹراسٹ ٹرانسفر فنکشن (CTF) پیرامیٹر کا تخمینہ پیچ پر مبنی CTF تخمینہ طریقہ62 کا استعمال کرتے ہوئے cryoSPARC میں انجام دیا گیا تھا۔ CTF فٹنگ ریزولوشن ≥4 Å والے فوٹومیکروگرافس کو بعد کے تجزیے سے خارج کر دیا گیا تھا۔ عام طور پر، cryoSPARC میں پوائنٹ سلیکشن کے لیے 500–1000 فوٹومیکروگرافس کا سب سیٹ استعمال کیا جاتا تھا، جس کے بعد ٹیمپلیٹ پر مبنی پارٹیکل سلیکشن کے لیے واضح حوالہ امیج حاصل کرنے کے لیے فلٹرنگ کے بعد 2D درجہ بندی کے کئی راؤنڈ ہوتے تھے۔ پھر ذرات کو 64 پکسل باؤنڈنگ بکس اور 4 گنا بائننگ کا استعمال کرتے ہوئے نکالا گیا۔ ناپسندیدہ ذرہ زمروں کو دور کرنے کے لیے 2D درجہ بندی کے کئی راؤنڈز کیے گئے۔ ابتدائی 3D ماڈل کو ab initio reconstruction کا استعمال کرتے ہوئے دوبارہ تعمیر کیا گیا تھا اور cryoSPARC میں نان یونیفارم ریفائنمنٹ کا استعمال کرتے ہوئے بہتر کیا گیا تھا۔ 3D درجہ بندی ARD heterogeneity کی بنیاد پر cryoSPARC یا RELION میں کی گئی تھی۔ جھلی ڈومینز کی کوئی خاص نسبت نہیں دیکھی گئی۔ ذرات کو C1 اور C2 طریقوں سے بہتر کیا گیا تھا۔ زیادہ C2 ریزولوشن والے ذرات کو C2 کے حوالے سے ہم آہنگ سمجھا جاتا تھا اور Bayesian refinement کے لیے RELION میں درآمد کیا جاتا تھا۔ اس کے بعد ذرات کو حتمی غیر یونیفارم اور مقامی تطہیر کے لیے واپس cryoSPARC میں منتقل کر دیا گیا۔ حتمی ریزولوشن اور ذرہ شمار ٹیبل 1 میں دکھائے گئے ہیں۔
نان + اے پی پینٹامرز پر کارروائی کرتے وقت، ہم نے جھلی ڈومینز (خاص طور پر تاکنا کا علاقہ) کی ریزولوشن کو بہتر بنانے کے لیے مختلف طریقے تلاش کیے، جیسے سگنل گھٹانا اور TMD ماسکنگ۔ تاہم، یہ کوششیں تاکنا کے علاقے میں ممکنہ طور پر انتہائی خرابی اور TMD کی مجموعی نسبت کی وجہ سے ناکام رہیں۔ حتمی ریزولیوشن کا حساب ایک ماسک کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا جو خود بخود cryoSPARC میں غیر یونیفارم پروسیسنگ طریقہ سے تیار کیا گیا تھا، بنیادی طور پر ARD کے علاقے کو نشانہ بنایا گیا تھا۔ اس نے جھلی ڈومینز (خاص طور پر VSLD خطہ) کے مقابلے میں نمایاں طور پر زیادہ ریزولوشن حاصل کیا۔
نانچنگ اور غیر فعال کیڑے کے apo فارمز کے ابتدائی ڈی نوو ماڈل سب سے پہلے Coot63 کا استعمال کرتے ہوئے تیار کیے گئے تھے، اور Nan اور Iav بگز کے ماڈل AlphaFold264 کا استعمال کرتے ہوئے کم اعتماد والے علاقوں کی شناخت کے لیے بنائے گئے تھے۔ Calmodulin ماڈلنگ بالترتیب PDB ایکسیسیشن 4JPZ56 اور 1CFD65 میں Ca2+-بائنڈنگ اور Ca2+-فری ماڈلز کے سخت جسمانی فٹ پر مبنی تھی۔ درست سٹیریو کیمسٹری اور اچھی جیومیٹری کو یقینی بنانے کے لیے کروی تطہیر کا استعمال کرتے ہوئے ماڈلز کو بہتر کیا گیا۔ فاسفیٹائڈیلچولین، فاسفیٹائیڈیلتھانولامین، اور فاسفیٹائڈیلسرین کو پھر اچھی طرح سے طے شدہ لپڈ کثافت کے طور پر ماڈل بنایا گیا تھا، اور NAM اور AP ligands کو تنگ جنکشن میں متعلقہ کثافت میں رکھا گیا تھا۔ کنسٹرائنٹ فائلیں PHENIX66 میں eLBOW کا استعمال کرتے ہوئے isoforms کے SMILES سٹرنگ سے تیار کی گئیں۔ آخر میں، ماڈلز کو PHENIX میں حقیقی جگہ میں مقامی گرڈ تلاش اور ثانوی ساخت کی رکاوٹوں کے ساتھ عالمی سطح پر مائنسائزیشن کا استعمال کرتے ہوئے بہتر کیا گیا۔ MolProbity سرور کو ماڈل ریفائنمنٹ اور ساختی تجزیہ کے لیے استعمال کیا گیا تھا، اور PyMOL اور UCSF Chimera X کا استعمال کرتے ہوئے عکاسی کی گئی تھی۔ 67,68,69 اپرچر تجزیہ HOLE سرور، 70 کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا اور کنسرف سرور17 کا استعمال کرتے ہوئے ترتیب کے تحفظ کی نقشہ سازی کی گئی تھی۔
Igor Pro 6.2، Excel Office 365، اور GraphPad Prism 7.0 کا استعمال کرتے ہوئے شماریاتی تجزیہ کیا گیا۔ تمام مقداری اعداد و شمار کو اوسط ± معیاری غلطی (SEM) کے طور پر پیش کیا گیا ہے۔ طالب علم کا ٹی ٹیسٹ (دو دم والا، بغیر جوڑا) دو گروپوں کا موازنہ کرنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ متعدد گروپوں کا موازنہ کرنے کے لیے ڈنیٹ کے پوسٹ ہاک ٹیسٹ کے بعد تغیر (ANOVA) کا یک طرفہ تجزیہ استعمال کیا گیا۔ *پی<0.05، **P<0.01، اور ***P<0.001 کو اعداد و شمار کی تقسیم کے لحاظ سے شماریاتی لحاظ سے اہم سمجھا جاتا تھا۔ Kd، Ki اقدار، اور ان کے غیر متناسب 95% اعتماد کے وقفوں کو گراف پیڈ پرزم 10 کا استعمال کرتے ہوئے شمار کیا گیا۔
مطالعہ کے طریقہ کار پر مزید تفصیلات کے لیے، براہ کرم اس مضمون میں منسلک نیچر پورٹ فولیو رپورٹ کا خلاصہ دیکھیں۔
ابتدائی ماڈل PDB 4JPZ اور 1CFD ڈیٹا بیس کے کیلموڈولن ماڈلز کا استعمال کرتے ہوئے بنایا گیا تھا۔ کوآرڈینیٹس کو پروٹین ڈیٹا بینک (PDB) میں الحاق نمبر 9NVN (Ligand کے بغیر Nan-Iav-CaM)، 9NVO (Nan-Iav-CaM نکوٹینامائڈ کے پابند)، 9NVP (Nan-Iav-CaM باؤنڈ نکوٹینامائڈ)، VEDTAN-9- اور aphenidolpyrrolline اور calcium کے پابند)، 9NVR (Nan-Iav-CaM aphenidolpyrrolline اور EDTA کے پابند)، اور 9NVS (Nan pentamer aphenidolpyrrolline کے پابند)۔ متعلقہ کریو الیکٹران مائیکروسکوپی امیجز کو الیکٹران مائیکروسکوپی ڈیٹا بیس (EMDB) میں درج ذیل الحاق نمبروں کے تحت جمع کیا جاتا ہے: EMD-49844 (Nan-Iav-CaM بغیر ligand)، EMD-49845 (Nan-Iav-CaM کمپلیکس nicotinanide-4MDC9-845)، EMD-49845 نیکوٹینامائڈ اور ای ڈی ٹی اے کے ساتھ)، EMD-49847 (Nan-Iav-CaM کمپلیکس جس میں aphidopyrrolline اور کیلشیم ہے)، EMD-49848 (Nan-Iav-CaM کمپلیکس aphidopyrrolline اور EDTA کے ساتھ)، اور EMD-49849 (Nan pentamerrolline کمپلیکس کے ساتھ)۔ فنکشنل تجزیہ کے لیے خام ڈیٹا اس مقالے میں پیش کیا گیا ہے۔
پوسٹ ٹائم: جنوری-28-2026